Methode 1: Extractiemethode (de methode die momenteel in mijn land wordt gebruikt; deze levert een lagere zuiverheid op, maar biedt lagere productiekosten.)
Extractie van oxytocine-oplossing: Neem 100 g gedroogd hypofyse-achterkwabpoeder en 30 g kwartspoeder, plaats ze in een kogelmolen en voeg gedestilleerd water toe. Voer de extractie vier keer uit volgens dezelfde procedure. De volumes gedestilleerd water die voor elke stap worden toegevoegd, zijn als volgt: 1,4 liter voor de eerste twee extracties en 1,3 liter voor de volgende twee. Elke extractie wordt gedurende 45 minuten uitgevoerd, gevolgd door centrifugeren om de vloeistof op te vangen; het resterende residu wordt vervolgens aan verdere extractie onderworpen. De vier resulterende extracten worden gecombineerd om de oxytocine-oplossing op te leveren. Samengevat: Gedroogd hypofyseachterkwabpoeder [Water, kogelmolen] → Oxytocine-extract → Chromatografische scheiding.
Neem 1500 g voor-behandelde synthetische zeoliet, voeg 20 liter van een 0,25% azijnzuuroplossing toe en-na roeren-giet het mengsel in een ionen-uitwisselingskolom. Zodra het niveau van de azijnzuuroplossing is gedaald tot een punt 2-3 cm boven het oppervlak van het zeolietbed, brengt u onmiddellijk het oxytocine-extract in. Handhaaf een geschikte stroomsnelheid en verzamel het resulterende witte, troebele eluaat (deze fractie bevat voornamelijk oxytocine; aangezien oxytocine een iso-elektrisch punt [pI] van 7,7 heeft-terwijl vasopressine een pI van 10,9 heeft, vormt vasopressine gemakkelijk positieve ionen en wordt dus op de kolom geadsorbeerd). Zodra het vloeistofniveau van het extract naar het oppervlak van het zeolietbed zakt, voegt u onmiddellijk gedestilleerd water toe en gaat u door met het verzamelen van het troebele eluaat totdat de stroom ophoudt. Pas de pH van het verzamelde troebele eluaat aan tot 3,5 met behulp van ijsazijn. Verwarm de oplossing snel in een waterbad tot 95 graden, handhaaf deze temperatuur gedurende 3 minuten, koel vervolgens de oplossing snel af en zet deze een nacht in de koelkast. Samengevat: Oxytocine-extract [HAc, synthetische zeolietkolom] → Troebel eluaat [HAc, verwarming] → Gescheiden oplossing → Adsorptie en elutie. Filtreer de gekoelde oplossing de volgende dag. Voeg aan het filtraat al roerend een bentonietslurry van 10% toe (voeg 3 ml slurry per 100 ml filtraat toe). Blijf gedurende 1 uur roeren om de adsorptie te vergemakkelijken en centrifugeer het mengsel vervolgens. Test de bovenstaande vloeistof met behulp van een sulfosalicylzuurreagensoplossing; de afwezigheid van enig neerslag geeft aan dat het adsorptieproces voltooid is. Als de adsorptie onvolledig is, herhaal dan het bentonietbehandelingsproces; combineer vervolgens de bentonietprecipitaten verkregen uit beide adsorptiestappen. Het bentoniet wordt vier keer geëlueerd met 1% azijnzuur (met volumes van respectievelijk 1,6 liter, 1,4 liter, 1,2 liter en 0,8 liter). Voor elk eluaat wordt *tert*-butyltrichloride toegevoegd zodra de oplossing tot 80 graden is verwarmd; de temperatuur wordt vervolgens verhoogd tot 95 graden, snel afgekoeld tot 25 graden en gefilterd of gecentrifugeerd. De vier resulterende filtraten worden gecombineerd om de potentie en de vasopressinelimiet te bepalen. De processtroom is als volgt: Gekoelde oplossing [Filtratie] → Filtraat [Bentonietslurry] → Adsorbaat [1% HAc] → Eluaat. Bereiding van Oxytocine-injectie:
De geteste oxytocine-oplossing, die aan de kwaliteitsnormen voldoet, wordt verdund tot een concentratie van 5 U/ml of 10 U/ml. Vervolgens wordt het gefiltreerd door een No. 4 of No. 5 trechter van gesinterd glas, in ampullen gevuld en gedurende 30 minuten met stromende stoom bij 100 graden gesteriliseerd om het eindproduct op te leveren. De processtroom is als volgt: Oxytocine-oplossing (assay goedgekeurd) [Filtratie, vullen, sterilisatie] → Oxytocine-injectie.
Regeneratie van synthetisch zeoliet: Het synthetische zeoliet wordt tweemaal gewassen met gedestilleerd water. Vervolgens worden 1,5 1 water (berekend op basis van 500 g zeoliet) en 150 g natriumchloride toegevoegd en wordt het mengsel 2 uur geroerd om weg te spoelen en vasopressine te verwijderen. De zeoliet wordt vervolgens gewassen met gedestilleerd water totdat er geen chloride-ionen meer overblijven. Er wordt een geschikte hoeveelheid water toegevoegd en de pH wordt met natriumhydroxide op 9 gebracht; het mengsel wordt 30 minuten geroerd, waarna het supernatant wordt gedecanteerd. Het zeoliet wordt gewassen met gedestilleerd water, de pH wordt met zwavelzuur op 5,5-6 gebracht en opnieuw met water gewassen tot het bijna neutraal is. Vervolgens wordt het gefilterd om overtollig water te verwijderen en bij 105 graden gedroogd voor toekomstig gebruik. Vóór gebruik wordt een geschikte hoeveelheid water toegevoegd en de pH wordt tijdens het roeren aangepast met behulp van ijsazijn om het weken mogelijk te maken. Bereiding van 10% bentonietslurry: Bentoniet en water worden gemengd in een massa{17}}tot-volumeverhouding van 1:10. Het mengsel wordt gedurende ongeveer 1 uur gemalen, gedurende welke tijd azijnzuur wordt toegevoegd om een stabiele pH van 3,5 te handhaven. De resulterende slurry wordt vervolgens in een koelkast bewaard voor toekomstig gebruik. Methode 2: Chemische synthese. Eerst wordt het heptapeptideamide (segmenten 3-9) gesynthetiseerd uitgaande van benzyloxycarbonyl-leucine *p*-nitrofenylester; vervolgens wordt benzyloxycarbonyl-S-benzylcysteïne-tyrosineazide (segmenten 1–2) gesynthetiseerd; en in de derde stap wordt oxytocine gesynthetiseerd.